1. Τι περιλαμβάνουν οι μη κλινικές μελέτες;
Απάντηση:Τα μη κλινικά πειράματα περιλαμβάνουν φαρμακολογικές μελέτες, γενικές δοκιμές τοξικότητας, πειράματα τοξικοκινητικής και μη κλινικής φαρμακοκινητικής, δοκιμές αναπαραγωγικής τοξικότητας, δοκιμές γονοτοξικότητας, καρκινογένεση και άλλες δοκιμές (φωτοτοξικότητα, εξάρτηση, ανοσοτοξικότητα) κ.λπ. Σε περιπτώσεις συνδυαστικής θεραπείας, μπορεί επίσης να διεξάγονται μη κλινικές μελέτες ασφάλειας συνδυασμού. Για ορισμένη υψηλή αναλογία (άνω του 10% της συνολικής συστηματικής έκθεσης και το επίπεδο έκθεσης σε μελέτες σε ζώα είναι χαμηλότερο από την έκθεση του ανθρώπου), μπορεί να απαιτηθεί η διεξαγωγή μη κλινικών μελετών ασφάλειας των μεταβολιτών.
2. Ποιος είναι ο σκοπός της μη κλινικής αξιολόγησης ασφάλειας;
Απάντηση:Ο σκοπός της μη κλινικής αξιολόγησης ασφάλειας περιλαμβάνει γενικά την αποσαφήνιση των χαρακτηριστικών αντίδρασης τοξικότητας που σχετίζονται με τα όργανα-στόχους, την εξάρτηση από τη δόση, τη σχέση έκθεσης και την πιθανή αναστρεψιμότητα. Αυτές οι πληροφορίες μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την εκτίμηση της ασφαλούς δόσης έναρξης και του εύρους δόσης για κλινικές δοκιμές σε ανθρώπους (όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, το NOAEL πρέπει να ληφθεί σε τοξικολογικά πειράματα για τον υπολογισμό της MRSD, της μέγιστης συνιστώμενης δόσης έναρξης) και για τον προσδιορισμό δεικτών κλινικής παρακολούθησης για πιθανές ανεπιθύμητες ενέργειες.
3. Ποιες μη κλινικές μελέτες απαιτούνται για πρώτες-σε-δοκιμές σε ανθρώπους;
Απάντηση:Για αυτό το ερώτημα, είναι πρώτα απαραίτητο να διευκρινιστεί το είδος του φαρμάκου. Το ICH M3 (R2) εφαρμόζεται σε κοινές καταστάσεις στην ανάπτυξη φαρμάκων και παρέχει γενικές κατευθυντήριες αρχές. Για τα βιολογικά, οι μη κλινικές μελέτες θα πρέπει να διεξάγονται σύμφωνα με τις απαιτήσεις του ICH S6.
⑴Φαρμακοκινητική:Πριν από την υποβολή του IND, τα δεδομένα για το μεταβολισμό του υπό έρευνα προϊόντος σε διαφορετικά είδη και τα δεδομένα μεταβολισμού in vitro στον άνθρωπο, καθώς και ο ρυθμός δέσμευσης με τις πρωτεΐνες του πλάσματος είναι επαρκή. Οι πληροφορίες σχετικά με την απορρόφηση, την κατανομή, τον in vivo μεταβολισμό και την απέκκριση θα πρέπει να συμπληρώνονται πριν από κλινικές δοκιμές μεγάλης{{1}κλίμακας (συνήθως φάση 3). Τα πειράματα απορρόφησης PK γενικά διεξάγονται σε πολλά είδη πριν από την υποβολή IND και τον προσδιορισμό PCC για την καλύτερη κατανόηση των χαρακτηριστικών PK του φαρμάκου σε διαφορετικά είδη, αν και δεν απαιτείται εδώ, κάτι που είναι λίγο περίεργο.
⑵Φαρμακολογία Ασφαλείας:Η αξιολόγηση των επιδράσεων στο καρδιαγγειακό, στο κεντρικό νευρικό και στο αναπνευστικό σύστημα θα πρέπει να ολοκληρωθεί πριν από την υποβολή του IND, το οποίο είναι ένας συνδυασμός τυπικών φαρμακολογικών δοκιμών ασφάλειας. Συμπληρωματικά φαρμακολογικά πειράματα ασφάλειας μπορούν να διεξαχθούν κατά τη διάρκεια κλινικών δοκιμών εάν είναι απαραίτητο.
⑶Τοξικότητα επαναλαμβανόμενης δόσης:Γενικά, ένα βραχυπρόθεσμο τεστ χρόνιας τοξικότητας οργανώνεται με βάση το πρώιμο δοσολογικό σχήμα του IND. Εάν η περίοδος δοσολογίας χρειαστεί να παραταθεί αργότερα, απαιτείται μια μακροπρόθεσμη δοκιμή χρόνιας τοξικότητας για να υποστηριχθεί.
⑷Γονιδιοτοξικότητα:Με σχετικά χαμηλό κόστος, ο συνδυασμός δοκιμής γονοτοξικότητας μπορεί να ολοκληρωθεί πριν από την υποβολή του IND.
⑸Καρκινογένεση:Ο έλεγχος καρκινογένεσης θα πρέπει να ολοκληρωθεί πριν από την έγκριση του φαρμάκου.
⑹Αναπαραγωγική τοξικότητα:Οι παρατηρήσεις και οι αξιολογήσεις του αναπαραγωγικού συστήματος θα πρέπει να περιλαμβάνονται σε δοκιμές τοξικότητας επαναλαμβανόμενης δόσης πριν από την υποβολή του IND για την προκαταρκτική αξιολόγηση της αναπαραγωγικής τοξικότητας, ενώ σε κλινικές δοκιμές αρκεί η αυστηρή αντισύλληψη. Οι μελέτες αναπαραγωγικής τοξικότητας Φάσης Ι/ΙΙ θα πρέπει να ολοκληρωθούν πριν από κλινικές δοκιμές μεγάλης-κλίμακας και οι μελέτες τοξικότητας στην αναπαραγωγή Φάσης ΙΙΙ θα πρέπει να ολοκληρωθούν πριν από την έγκριση.
⑺Φωτοτοξικότητα:Η αξιολόγηση της φωτοτοξικότητας θα πρέπει να ολοκληρωθεί πριν από την υποβολή του IND. Εάν η μοριακή απορροφητικότητα είναι μεγαλύτερη από 1000 M-1cm-1, θεωρείται ότι υπάρχει κίνδυνος φωτοτοξικότητας και η δοκιμή φωτοτοξικότητας θα πρέπει να διεξάγεται πριν από κλινικές δοκιμές μεγάλης κλίμακας.
4. Πώς πρέπει να ορίζονται οι δόσεις στις τοξικολογικές εξετάσεις; Πώς πρέπει να επιλεγεί η υψηλότερη δόση;
Απάντηση:Αναφερόμενοι στις "Αρχές τεχνικής καθοδήγησης για δοκιμές τοξικότητας επαναλαμβανόμενων δόσεων φαρμάκων", "Καταρχήν, οι υψηλές δόσεις θα πρέπει να προκαλούν εμφανείς τοξικές αντιδράσεις στα ζώα, οι χαμηλές δόσεις θα πρέπει να είναι ισοδύναμες ή υψηλότερες από την αποτελεσματική δόση σε ζώα ή κλινική χρήση και οι μεσαίες δόσεις θα πρέπει να ορίζονται μεταξύ υψηλών δόσεων και χαμηλών δόσεων με βάση τα χαρακτηριστικά της τοξικότητας{0}της δόσης."
Στην πράξη, λαμβάνοντας υπόψη το ακριβό κόστος των τοξικολογικών δοκιμών, η διεξαγωγή μιας-δοκιμής εύρεσης εύρους δόσεων (DRF) με λίγα μη-ανθρώπινα πρωτεύοντα είναι η πιο οικονομική-αποτελεσματική και η πιο αποτελεσματική μέθοδος-εξοικονόμησης κόστους. Η δόση για τις δοκιμές DRF θα πρέπει επίσης να καθοριστεί περαιτέρω με βάση προκαταρκτικές μελέτες ασφάλειας που πραγματοποιήθηκαν κατά τον πρώιμο προσδιορισμό της PCC και τις φαρμακολογικές μελέτες. Πολλά ιδρύματα πραγματοποιούν τώρα επίσης δοκιμές οξείας τοξικότητας παράλληλα με τις δοκιμές DRF, οι οποίες είναι μη-δοκιμές GLP, όπως αναφέρεται στο M3 (R2), ακολουθώντας την αρχή 3R για μείωση της χρήσης ζώων.
Για ομάδες χαμηλής, μεσαίας και υψηλής δόσης, χρησιμοποιείται γενικά μια απόσταση 2-3 φορές. Σε επίσημες τοξικολογικές δοκιμές, η ιδανική κατάσταση είναι ότι η ομάδα υψηλής δόσης μπορεί να επιδείξει εμφανή τοξικότητα και η ομάδα χαμηλής ή μέσης δόσης μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως NOAEL.
Επιπλέον, για την επιλογή της υψηλότερης δόσης, το M3 (R2) παρέχει επίσης τυπικές απαντήσεις. Με απλά λόγια, η υψηλότερη δόση στην τοξικολογία θα πρέπει είτε να είναι η μέγιστη ανεκτή δόση (MTD) είτε η μέγιστη εφικτή δόση (MFD, η οποία μπορεί να γίνει κατανοητή ως η μέγιστη δόση που μπορούν να ανεχθούν τα ζώα με βάση τα χαρακτηριστικά του προϊόντος και των ζώων), είτε θα πρέπει να επιτυγχάνει κορεσμό έκθεσης ή το επίπεδο έκθεσης πρέπει να είναι αρκετά υψηλό (φτάνοντας 50 φορές την προβλεπόμενη κλινική δόση). Γενικά, τα 1000 mg/kg/ημέρα θεωρούνται επαρκή εκτός εάν η προβλεπόμενη κλινική δόση φτάσει το 1g/ημέρα και το επίπεδο έκθεσης των 1000 mg/kg δεν φθάνει το 10πλάσιο του επιπέδου κλινικής έκθεσης, οπότε θα πρέπει να αυξήσετε περαιτέρω τη δόση σε 10 φορές το επίπεδο κλινικής έκθεσης ή 2000 mg/kg/ημέρα.
5. Ποιες μελέτες στη μη κλινική έρευνα ασφάλειας πρέπει να ακολουθούν την GLP και ποιες όχι;
Απάντηση:Οι φαρμακολογικές και φαρμακοκινητικές μελέτες δεν χρειάζεται να ακολουθούν την GLP, ενώ οι μελέτες φαρμακολογικής ασφάλειας, γονοτοξικότητας, τοξικότητας στην αναπαραγωγή και τοξικότητας επαναλαμβανόμενης δόσης πρέπει να ακολουθούν την GLP.
6. Πόσο διαρκεί η διάρκεια των μη κλινικών μελετών τοξικότητας επαναλαμβανόμενης δόσης;
Απάντηση:Οι απαιτήσεις διάρκειας για την υποστήριξη της διεξαγωγής κλινικών δοκιμών και την έγκριση της αγοράς είναι διαφορετικές και πρέπει να είναι συγκεκριμένες για τη δοσολογική περίοδο των κλινικών δοκιμών. Για παράδειγμα, για ασθενείς με σκλήρυνση κατά πλάκας, η ελάχιστη προγραμματισμένη περίοδος κλινικής δοκιμής είναι δύο χρόνια. Επομένως, κατά την εγγραφή ασθενών με σκλήρυνση κατά πλάκας σε κλινικές δοκιμές, απαιτείται μελέτη χρόνιας τοξικότητας σε τρωκτικά 6{-μηνών και μη-τρωκτικών 6 μηνών, η οποία είναι επαρκής για να υποστηρίξει την έγκριση της αγοράς. Για μη ογκολογικά φάρμακα, χρησιμοποιείται γενικά μια μελέτη χρόνιας τοξικότητας διάρκειας 4 εβδομάδων για την υποστήριξη μιας περιόδου δοσολογίας που δεν υπερβαίνει τις 4 εβδομάδες για κλινικές δοκιμές πρώτης σε άνθρωπο.
7. Πώς να επιλέξετε πειραματόζωα για μη κλινική αξιολόγηση ασφάλειας;
Απάντηση:Γενικά, χρησιμοποιούνται δύο τύποι ζώων, τα τρωκτικά με τους αρουραίους να είναι η προτιμώμενη επιλογή και τα μη-τρωκτικά με τα σκυλιά Beagle να είναι η προτιμώμενη επιλογή. Φυσικά, θα πρέπει επίσης να τηρούνται συγκεκριμένες αρχές-ανάλυσης συγκεκριμένων προϊόντων. Για τα μικρά μόρια, η επιλογή των ειδών θα πρέπει κυρίως να λαμβάνει υπόψη τα μεταβολικά χαρακτηριστικά του υπό έρευνα προϊόντος σε ζώα που είναι παρόμοια με τους ανθρώπους. Μπορεί να γίνει αναφορά στο "Analysis and Identification Test of Metabolites of Investigational Products in CD-1 Mice, SD Rats, Beagle Dogs, Cynomolgus Monkeys and Human Liver Microsomes", επιλέγοντας είδη με μεταβολικά χαρακτηριστικά παρόμοια με τον άνθρωπο, δηλαδή είδη με παρόμοιες ποσότητες και τύπους μεταβολιτών με τον άνθρωπο. Επιπλέον, τα επιλεγμένα είδη θα πρέπει να είναι ευαίσθητα στο υπό έρευνα προϊόν. Με βάση την προηγούμενη εμπειρία, για ένα φάρμακο μικρού μορίου, τα μεταβολικά του χαρακτηριστικά στους σκύλους Beagle μπορεί να είναι παρόμοια με τους ανθρώπους αλλά με χαμηλή έκθεση.
