Θρόμβωση AV shunt σε NHPs: ερμηνεία της ροής, του θρόμβου και των τελικών σημείων αιμορραγίας
Η ποσότητα του θρόμβου που ανακτήθηκε στο τέλος μιας μελέτης θρόμβωσης αρτηριοφλεβικής (AV) παροχέτευσης είναι μία ανάγνωση μεταξύ πολλών. Σε έναΜοντέλο διακλάδωσης AV εκτός από πρωτεύοντα (NHP)., το αίμα διατρέχει ένα καθορισμένο εξωσωματικό τμήμα δοκιμής υπό ροή. Η εγκατάσταση υποστηρίζει την αξιολόγηση της συμπεριφοράς ροής και του σχηματισμού θρόμβου σε μια επιφάνεια που έρχεται σε επαφή με το αίμα και τα συμπληρωματικά τελικά σημεία αιμόστασης περιγράφουν την πλευρά της ασφάλειας μιας αντιθρομβωτικής απόκρισης.
Αυτές οι μετρήσεις απαντούν σε διαφορετικές ερωτήσεις. Η ροή υποδεικνύει εάν ο αναπτυσσόμενος θρόμβος επηρεάζει τη βατότητα. Το φορτίο θρόμβου περιγράφει υλικό που εναποτίθεται πάνω ή εντός του τμήματος δοκιμής.Αιμορραγία και αιμόστασηΤα μέτρα δείχνουν εάν η αναστολή της θρόμβωσης έχει υπερβολική επίδραση στη φυσιολογική αιμόσταση. Κανένα μεμονωμένο τελικό σημείο δεν καλύπτει και τις τρεις διαστάσεις της φαρμακολογίας.
Τι μετρά το μοντέλο AV shunt
Μοντέλα θρόμβωσης AV shuntτοποθετήστε μια δοκιμαστική συσκευή ή ένα τμήμα μοσχεύματος σε ένα κύκλωμα που το εκθέτει σε ροή αίματος. Η επαφή με μια ξένη επιφάνεια, η τοπική γεωμετρία και το προκύπτον πεδίο ροής προκαλούν την προσκόλληση και ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων, την πήξη και το σχηματισμό ινώδους. Η ισορροπία μεταξύ αυτών των διεργασιών εξαρτάται από το αντικείμενο δοκιμής, το υλικό επιφάνειας, τη γεωμετρία της συσκευής και τις αιμοδυναμικές συνθήκες, καθώς και από την αρχική αιματολογική κατάσταση του ζώου.
Η ιστορική εργασία καθιέρωσε τη σκοπιμότητα της μέτρησης του σχηματισμού θρόμβου σε πιθήκους rhesus χρησιμοποιώντας συσκευές δοκιμής που εκτέθηκαν σε αίμα σε αρτηριοαρτηριακές ή αρτηριοφλεβικές παροχετεύσεις. Σε μια μελέτη, ο θρόμβος που εναποτέθηκε κατά τη διάρκεια μιας καθορισμένης έκθεσης ποσοτικοποιήθηκε βαρυμετρικά. Η γεωμετρία και το υλικό της συσκευής επηρέασαν την ποσότητα που ανακτήθηκε και οι ερευνητές ανέφεραν πιο προβλέψιμη ροή στο AV παρά στην αρτηριοαρτηριακή διαμόρφωση.[1] Μια σχετική μελέτη χρησιμοποίησε το μοντέλο για σύγκρισηαντιθρομβωτικοί παράγοντεςκαι συνδυασμένη βαρυμετρική μέτρηση θρόμβου με υπερδομική εκτίμηση.[2] Αυτές οι μελέτες παρέχουν απόδειξη αρχής, όχι έτοιμο πρωτόκολλο ή καθολική περιοχή αναφοράς για μια σύγχρονη μελέτη NHP.
Αντιμετωπίστε το μοντέλο ως μια ελεγχόμενη, οξεία θρομβογόνο πρόκληση που βασίζεται στη ροή του αίματος και μια καθορισμένη επιφάνεια επαφής με το αίμα. Δεν αναπαράγει κάθε χαρακτηριστικό της αυτόματης αρτηριακής ή φλεβικής θρόμβωσης σε ασθενείς. Ένα τελικό σημείο θρόμβου που σχετίζεται με τη συσκευή δεν θα πρέπει να διαβάζεται ως άμεσος αντιπρόσωπος για ρήξη πλάκας, φλεβική θρομβοεμβολή, εγκεφαλικό επεισόδιο, έμφραγμα του μυοκαρδίου ή κλινική αποτυχία μοσχεύματος.
Τρεις τομείς τελικού σημείου και γιατί πρέπει να παραμείνουν διακριτοί
1. Διαβατότητα ροής και διακλάδωσης
Η ροή είναι μια λειτουργική ανάγνωση της εξελισσόμενης αλληλεπίδρασης μεταξύ του θρόμβου και του κυκλώματος δοκιμής. Ανάλογα με το σχεδιασμό της μελέτης, οι χρήσιμες περιλήψεις περιλαμβάνουν τη γραμμή βάσης και το προφίλ σειριακής ροής, την αλλαγή από τη γραμμή βάσης, τη ροή με την πάροδο του χρόνου ή τον χρόνο σε μια προκαθορισμένη μείωση ή διακοπή ροής. Εάν η ροή παρακολουθείται συνεχώς, τα δεδομένα δείχνουν πότε αρχίζει μια αλλαγή και αν αυτή διατηρείται, πληροφορίες που μια μέτρηση από μόνη της δεν μπορεί να παρέχει.
Η ροή πρέπει να ερμηνεύεται σε σχέση με το σύστημα μέτρησης. Η τοποθέτηση του αισθητήρα, η αντίσταση του κυκλώματος, οι διαστάσεις της συσκευής, οι συνθήκες πίεσης, η θερμοκρασία και οι τεχνικές διακοπές επηρεάζουν το καταγεγραμμένο σήμα. Ένα πρωτόκολλο θα πρέπει να ορίζει το αποδεκτό εύρος γραμμής βάσης, τον τρόπο χειρισμού των τεχνουργημάτων σήματος και τι συνιστά ερμηνεύσιμη μείωση της ροής πριν συγκριθούν οι ομάδες θεραπείας. Το "Time to clusion" έχει νόημα μόνο όταν το όριο και το παράθυρο παρατήρησης έχουν προκαθοριστεί και το μοντέλο φτάσει αξιόπιστα σε αυτό το συμβάν υπό τις επιλεγμένες συνθήκες.
Μια χαμηλότερη μάζα θρόμβου δεν αποδεικνύει ότι η ροή διατηρήθηκε και η διατηρημένη ροή δεν αποδεικνύει ότι σχηματίστηκε μικρός θρόμβος. Μια μη αποφρακτική κατάθεση συσσωρεύεται χωρίς απότομη αλλαγή ροής. ένα στρατηγικά τοποθετημένο κοίτασμα μειώνει τη ροή παρά τη μέτρια συνολική μάζα. Η ροή και το φορτίο θρόμβου είναι συμπληρωματικά τελικά σημεία και κανένα δεν υποκαθιστά το άλλο.
2. Επιβάρυνση και σύνθεση θρόμβου
Η αξιολόγηση του τερματικού θρόμβου ποσοτικοποιεί το υλικό που σχηματίζεται πάνω ή εντός του τμήματος δοκιμής. Η βαρυμετρική μέτρηση είναι μια άμεση, καθιερωμένη προσέγγιση στην ιστορική βιβλιογραφία των πρωτευόντων, αλλά το αποτέλεσμα εξαρτάται από την τυποποιημένη ανάκτηση, χειρισμό και ζύγιση. Το πρωτόκολλο θα πρέπει να προσδιορίζει εάν το μετρούμενο τελικό σημείο είναι υγρή ή επεξεργασμένη μάζα, πώς αντιμετωπίζεται το υπολειπόμενο αίμα και εάν τα αποτελέσματα κανονικοποιούνται σε ένα σχετικό χαρακτηριστικό συσκευής, όπως η εκτεθειμένη περιοχή ή η διάρκεια έκθεσης. Αυτές οι επιλογές πρέπει να είναι συνεπείς μεταξύ των ομάδων και να αναφέρονται με τον ίδιο τρόπο.
Η μάζα από μόνη της δεν αποκαλύπτει τι περιέχει ο θρόμβος ή πώς σχηματίστηκε. Όπου δικαιολογείται επιστημονικά, η απεικόνιση ή η μικροσκοπία και η στοχευμένη αξιολόγηση των συστατικών των αιμοπεταλίων και του ινώδους προσθέτουν μηχανιστικό πλαίσιο. Τέτοιες αναλύσεις βοηθούν στη διάκριση μιας αλλαγής στη συνολική εναπόθεση από μια αλλαγή στη σχετική συνεισφορά του πλούσιου σε αιμοπετάλια και του πλούσιου σε ινώδες υλικού. Καθορίστε τη μέθοδο, τη θέση δειγματοληψίας και την προσέγγιση βαθμολόγησης εκ των προτέρων και αντιμετωπίστε μια ανάγνωση διερευνητικής μορφολογίας ως διερευνητική μέχρι να πιστοποιηθεί.
Ένα χρήσιμο σύνολο τελικών σημείων συνδέει την παρατήρηση εντός κυκλώματος με το ανακτηθέν δείγμα: τροχιά ροής κατά την έκθεση, ποσότητα θρόμβου στο τελικό σημείο και, όπου περιλαμβάνεται, χαρακτηρισμός της σύνθεσης του θρόμβου. Αυτή η ακολουθία δίνει πληρέστερη ένδειξη από ένα μόνο τερματικό βάρος.
3. Αιμορραγία και αιμόσταση
Αντιθρομβωτική δράση και αυτήεπιδράσεις στην αιμόστασηανήκουν στην ίδια ανάλυση. Μια μελέτη συνήθως συνδυάζει κλινικές παρατηρήσεις αιμορραγίας, αξιολόγηση θέσεων πρόσβασης ή επέμβασης, μέτρο αιμορραγίας που καθορίζεται από το πρωτόκολλο και εργαστηριακά ή φαρμακοδυναμικά δεδομένα σχετικά με τον μηχανισμό του φαρμάκου. Ο ακριβής πίνακας ακολουθεί το δοκιμαστικό άρθρο και την ερώτηση της μελέτης και όχι ένα πρότυπο που αντιγράφεται από άλλο είδος ή τάξη φαρμακολογίας.
Ο χρόνος αιμορραγίας, όταν χρησιμοποιείται, είναι ένα μέτρο που εξαρτάται από το πλαίσιο και επηρεάζεται από τη μέθοδο και την εκτέλεση. δεν αποτελεί άμεση εκτίμηση του κλινικού κινδύνου αιμορραγίας. Ομοίως, οι συνήθεις δοκιμές πήξης, οι μετρήσεις αιμοπεταλίων ή οι δοκιμασίες της λειτουργίας των αιμοπεταλίων καταγράφουν μόνο μέρος της αιμόστασης και δεν είναι εξίσου ευαίσθητες σε κάθε μηχανισμό. Η ερμηνεία είναι ισχυρότερη όταν οι παρατηρήσεις συνδυάζονται με την έκθεση και τα φαρμακοδυναμικά δεδομένα, όπως η σχετική ανάλυση οδού πήξης ή αιμοπεταλίων, αντί να αντιμετωπίζεται οποιοδήποτε μεμονωμένο εργαστηριακό αποτέλεσμα ως πλήρες συμπέρασμα ασφάλειας.
Τα τελικά σημεία αιμορραγίας απαιτούν επίσης μια τυποποιημένη προσέγγιση και μιακαλή μεταχείριση των ζώωναναθεώρηση σε NHPs. Το πρωτόκολλο πρέπει να αναφέρει τον τρόπο με τον οποίο παρατηρούνται και βαθμολογούνται τα συμβάντα, η σχετική περίοδος παρατήρησης, τα κριτήρια παρακολούθησης ή παρέμβασης και πώς διακρίνεται η διαδικαστική αιμορραγία από ένα σήμα που σχετίζεται με το φάρμακο. Ένα εύρημα μειωμένης θρόμβωσης χωρίς ανιχνευμένη αιμορραγία σε μια μικρή μελέτη δεν υποστηρίζει τον ισχυρισμό "χωρίς αιμορραγικό κίνδυνο".
Δημιουργήστε ένα πακέτο τελικού σημείου γύρω από το ερώτημα της φαρμακολογίας
Η επιλογή τελικού σημείου ακολουθεί την επιδιωκόμενη απόφαση. Ένα αντιαιμοπεταλιακό πρόγραμμα συνήθως χρειάζεται εναπόθεση ή λειτουργία αιμοπεταλίων, ροή και αξιολόγηση αιμόστασης. Ένα αντιπηκτικό πρόγραμμα ενεργοποιεί τη φαρμακοδυναμική και την έκθεση της οδού πήξης, τα οποία καθιστούν ερμηνεύσιμη μια αλλαγή στο σχηματισμό θρόμβου. Μια συσκευή τροποποίησης επιφανειών δίνει έμφαση στην εναπόθεση και τον χαρακτηρισμό της επιφάνειας για συγκεκριμένο υλικό. Σε κάθε περίπτωση τα τελικά σημεία ανατρέχουν στον μηχανισμό δράσης και στα όρια του μοντέλου.
Μια συνεκτική μελέτη AV shunt συνήθως ευθυγραμμίζει τέσσερις ροές πληροφοριών:
- Λειτουργική απόκριση:συμπεριφορά ροής και οποιοδήποτε προκαθορισμένο μέτρο βατότητας ή απόφραξης.
- Απόκριση θρόμβου:ποσό που κατατέθηκε, με τη σύνθεση ή τη μορφολογία να αξιολογείται όταν δικαιολογείται.
- Φαρμακολογία:φαρμακοδυναμικές μετρήσεις σχετικά με την έκθεση του τεστ-άρθρου και τις σχετικές με τον μηχανισμό σε ερμηνεύσιμα χρονικά σημεία.
- Αιμοστατικό πλαίσιο:κλινικές παρατηρήσεις αιμορραγίας και επιλεγμένα εργαστηριακά ή λειτουργικά μέτρα κατάλληλα για τον υποψήφιο.
Το σχέδιο ανάλυσης θα πρέπει να προσδιορίζει το πρωτεύον τελικό σημείο και να το διακρίνει από υποστηρικτικά ή διερευνητικά μέτρα. Τυχαιοποίηση, τυφλή αξιολόγηση όπου είναι εφικτό, συνθήκες ελέγχου,αιτιολόγηση μεγέθους δείγματοςκαι ο προκαθορισμένος χειρισμός τεχνικών αστοχιών μειώνει την ερμηνευτική αβεβαιότητα. Όταν εξετάζεται η επανειλημμένη έκθεση ή συγκρίσεις μεταξύ ζώων, ο σχεδιασμός πρέπει να λαμβάνει υπόψη τη μεταφορά, την έκπλυση και τη βιολογική μεταβλητότητα των επιλεγμένων τελικών σημείων.
Πηγές μεταβλητότητας που αλλάζουν το αποτέλεσμα
Ένα αποτέλεσμα θρόμβωσης AV shunt είναι ειδικό για την πειραματική διαμόρφωση. Το υλικό και η γεωμετρία της συσκευής, το εμβαδόν της εκτεθειμένης επιφάνειας, οι διαστάσεις του κυκλώματος, οι συνθήκες ροής, η διάρκεια έκθεσης και η περι-διαδικαστική διαχείριση επηρεάζουν το σχηματισμό θρόμβου. Βιολογικοί παράγοντες, συμπεριλαμβανομένου του αριθμού και της λειτουργίας των αιμοπεταλίων, του αιματοκρίτη, της κατάστασης πήξης, του είδους, της ατομικής μεταβλητότητας και της ταυτόχρονης λήψης φαρμάκων, επηρεάζουν επίσης την ανταπόκριση.
Αυτοί οι παράγοντες δεν είναι απλώς τεχνικές λεπτομέρειες. Εάν διαφέρουν μεταξύ των ομάδων ή των περιόδων μελέτης, αλλάζουν το εμφανές αποτέλεσμα της θεραπείας. Η βασική αιματολογία, η συνεπής προετοιμασία και χειρισμός της συσκευής, η βαθμονομημένη μέτρηση ροής, η διαδικαστική τυποποίηση και η πλήρης τεκμηρίωση αποτελούν μέρος της εγκυρότητας του τελικού σημείου. Ένα πρωτόκολλο θα πρέπει επίσης να ορίζει πώς θα καταγραφεί και θα αντιμετωπιστεί στην ανάλυση η απροσδόκητη διακοπή της ροής, η αστοχία της συσκευής ή ο ανεπαρκής σχηματισμός θρόμβου.
Το πλαίσιο NHP προσθέτει αξία όταν η μελέτη απαιτεί μια ολοκληρωμένη in vivo αξιολόγηση της έκθεσης, της φαρμακολογικής και της αιμοστατικής απόκρισης σε ένα πρωτεύον θηλαστικό. Δεν εξαλείφει την ανάγκη για πιστοποίηση μοντέλου. Ιστορικές μελέτες rhesus δείχνουν ότι τα AV shunts υποστηρίζουν μελέτες δημιουργίας θρόμβου και αντιθρομβωτικών επιδράσεων, αλλά δεν αποδεικνύουν ότι τα αποτελέσματα μεταφέρονται αμετάβλητα σε άλλο είδος, διαμόρφωση συσκευής, κατηγορία ένωσης ή σύγχρονη ρύθμιση μελέτης.[1,2]
Μεταφραστική ερμηνεία: προφίλ οφέλους-κινδύνου
Συμπέρασμα ότι ένας υποψήφιος «μείωσε τη θρόμβωση» λέει λίγα από μόνος του. Τα ερωτήματα είναι εάν η μείωση εμφανίστηκε στη ροή, στο φορτίο θρόμβου ή και στα δύο. αν παρακολουθούσε την έκθεση στο φάρμακο και τον αναμενόμενο φαρμακοδυναμικό μηχανισμό· και τι δείχνουν τα δεδομένα αιμόστασης στο ίδιο εύρος έκθεσης. Η ασυμφωνία μεταξύ των τελικών σημείων είναι ενημερωτική και συνήθως αντανακλά διαφορές στην ευαισθησία, το χρόνο, τη θέση ή τον μηχανισμό θρόμβου παρά ένα αποτυχημένο πείραμα.
Ένα μοντέλο θρόμβωσης NHP AV συμβάλλει στην προκλινική αξιολόγηση της αντιθρομβωτικής φαρμακολογίας όταν η διαμόρφωση και τα τελικά σημεία του ταιριάζουν με την απόφαση. Η δύναμή του έγκειται στο ότι φέρνει τη ροή, τον θρόμβο που σχετίζεται με τη συσκευή και τη συστημική φαρμακολογία σε ένα πειραματικό πλαίσιο. Τα όριά του έχουν εξίσου μεγάλη σημασία: είναι ένα οξύ μοντέλο που εξαρτάται από τη διαμόρφωση και δεν μπορεί από μόνο του να καθορίσει την κλινική αποτελεσματικότητα, τον κλινικό κίνδυνο αιμορραγίας ή το θεραπευτικό όφελος σε έναν συγκεκριμένο πληθυσμό ασθενών.
Για τις μεταφραστικές ομάδες, η πρακτική προτεραιότητα είναι να ορίσουν πρώτα την ερώτηση και μετά να επιλέξουν ένα τελικό σημείο ροής, ένα τελικό σημείο θρόμβου και ένα πακέτο αιμόστασης που έχουν σχεδιαστεί για ανάγνωση μαζί. Αυτή η ευθυγράμμιση, όχι ο αριθμός των μετρήσεων, καθορίζει εάν η μελέτη παράγει στοιχεία σχετικά με την απόφαση.
Συχνές ερωτήσεις
Ε: Τι μετράει ένα μοντέλο θρόμβωσης παροχέτευσης NHP AV;
Α: Αξιολογεί τον σχηματισμό θρόμβου πάνω ή εντός ενός καθορισμένου τμήματος δοκιμής επαφής με το αίμα υπό ροή σε ένα NHP. Ανάλογα με το πρωτόκολλο, τα τελικά σημεία περιλαμβάνουν τη συμπεριφορά ροής, το ανακτηθέν φορτίο θρόμβου, τη σύνθεση του θρόμβου, την έκθεση στο φάρμακο, τη φαρμακοδυναμική δραστηριότητα και τις αιμοστατικές επιδράσεις.
Ε: Γιατί να μετρήσετε τη ροή καθώς και τη μάζα του θρόμβου;
Α: Η ροή περιγράφει τη λειτουργική βατότητα κατά τη διάρκεια του πειράματος, ενώ η μάζα θρόμβου ποσοτικοποιεί το αποτιθέμενο υλικό στο τελικό σημείο συλλογής. Τα μέτρα είναι σχετικά, αλλά όχι εναλλάξιμα: μερικές φορές ο θρόμβος συσσωρεύεται χωρίς απόφραξη και ένας μικρός στρατηγικά τοποθετημένος θρόμβος επηρεάζει δυσανάλογα τη ροή.
Ε: Το χαμηλότερο φορτίο θρόμβου σημαίνει χαμηλότερο κίνδυνο αιμορραγίας;
Α: Όχι. Η αντιθρομβωτική αποτελεσματικότητα και η αιμορραγία είναι σχετικοί φαρμακολογικοί τομείς που πρέπει να μετρώνται ξεχωριστά. Μια μελέτη θα πρέπει να περιλαμβάνει αξιολόγηση αιμόστασης κατάλληλη για τον μηχανισμό και η μείωση του φορτίου του θρόμβου από μόνη της δεν αποδεικνύει απουσία κλινικού κινδύνου αιμορραγίας.
Ε: Μπορούν τα αποτελέσματα του AV shunt να προβλέψουν τα κλινικά αποτελέσματα της θρόμβωσης;
Α: Παρέχουν προκλινικά στοιχεία σχετικά με την αντιθρομβωτική δραστηριότητα σε μια καθορισμένη διαμόρφωση συσκευής και ροής. Δεν προβλέπουν από μόνα τους τα κλινικά αποτελέσματα ούτε αναπαράγουν όλους τους μηχανισμούς αυτόματης αρτηριακής ή φλεβικής θρόμβωσης.
Αναφορές
- Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA.Ένα μοντέλο αγγειακής διακλάδωσης μη ανθρώπινων πρωτευόντων για δημιουργία θρόμβων.Εργαστηριακή Έρευνα. 1976;34(6):558-564.PubMed PMID: 819713.
- Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA, Mohammad SF.Οι επιδράσεις των αντιθρομβωτικών παραγόντων που αξιολογήθηκαν σε ένα μοντέλο αγγειακής παράκαμψης πρωτευόντων εκτός ανθρώπου.American Journal of Pathology. 1976.PubMed PMID: 820202; πλήρες κείμενο.
